化學發(fā)光免疫檢測中,我們需要用吖啶酯先標記上抗體蛋白,才能在免疫反應后對待測物進行檢測,因此如何標記抗體就非常的關鍵了,吖啶酯類化合物已被廣泛證明為非常有用的化學發(fā)光標記物,其穩(wěn)定性、標記特異性和檢測靈敏度都超越放射性同位素。
吖啶酯發(fā)光標記原理:
在堿性條件下,NHS 作為離去基團被取代,蛋白質(zhì)與吖啶酯形成穩(wěn)定的酰胺鍵。反應完成后,多余的吖啶鹽通過脫鹽柱除去。在堿性過氧化氫存在下,吖啶標記的蛋白不需要酶催化就可自行發(fā)光。
激發(fā)液的加入 導致反應體系立即釋放約 430 nm 的光子,通過使用標準光度計(luminometer)計數(shù)光子數(shù)量就可檢測蛋白質(zhì)的濃度。因為此發(fā)光過程是十分短暫(整個過程在 2 秒鐘內(nèi)完成),樣品必須直接放在光度計內(nèi)部光 子探測器前面。蛋白質(zhì)、多肽、抗體、核酸都可以用吖啶酯標記。
吖啶酯發(fā)光標記注意事項
吖啶酯有多種類型,常見的各種吖啶酯、吖啶磺酰胺、吖啶磺酸鹽等等都屬于吖啶酯類化合物。需要注意的是,溶解吖啶琥珀酰亞胺酯時,使用的 DMF 必須嚴格無水,防止吖啶酯水解.不使用時,干燥密封-20℃保存。
如果是不含-NHS 的吖啶羧酸需要加入縮合劑 EDCI 等,才能與含胺基的蛋白發(fā)生偶聯(lián)反應。吖啶酰肼含有游離氨基,所以更加適用直接偶聯(lián)含有醛基的多糖,核酸或者蛋白質(zhì)等。
吖啶酯發(fā)光優(yōu)勢
1.針對傳統(tǒng)吖啶酯,在其結(jié)構(gòu)上進行了修飾,增大了位阻,增強了抗水解性,如在室溫下,在 pH 為 7.0 的 PB 緩沖液中很穩(wěn)定。
2.光釋放快速集中、發(fā)光效率高、發(fā)光強度大,易與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)且聯(lián)結(jié)后光子產(chǎn)率不減少。
3.發(fā)光反應干擾因素少,標記物穩(wěn)定( 在2 - 8 ℃下可保存數(shù)月之久)
德晟科技研發(fā)生產(chǎn)的吖啶酯屬于自主研發(fā)生產(chǎn),對吖啶酯的研究開發(fā)投入了大量精力,所以在質(zhì)量上的把控更加的嚴格。目前公司產(chǎn)品已銷往全球一百多個國家,99%以上客戶都收到好評復購,產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu),價格有優(yōu)惠,有意向了解可以來電咨詢,德晟歡迎您的來電。