許多生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都需要使用緩沖液來(lái)維持有效的pH，這很重要，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)和酶對(duì)pH的變化敏感，因此為當(dāng)前和下游實(shí)驗(yàn)選擇正確的緩沖液至關(guān)重要。在本文中，我將簡(jiǎn)要討論HEPES和PIPES在配置及使用過(guò)程中要考慮的一些重要因素，希望能對(duì)大家有所幫助。

如何制作HEPES及使用注意事項(xiàng)

HEPES是兩性離子Good's緩沖液，在6.8至8.2的pH范圍內(nèi)有效。這使HEPES在生理pH值下成為有效的緩沖液。該緩沖液可用于多種生物的細(xì)胞培養(yǎng)基中。它也可用作蛋白質(zhì)研究中的結(jié)合緩沖液，用于陽(yáng)離子交換洗脫實(shí)驗(yàn)中，以及在凝膠電泳中用作運(yùn)行緩沖液。

HEPES的制備步驟：

要制備1升1M HEPES緩沖溶液，請(qǐng)將238.30 g GoldBio HEPES溶解 在750 mL dH 2 O中。使用10N氫氧化鈉調(diào)節(jié)至所需的pH。您可以在1M HEPES PDF協(xié)議中使用一張表。用dH 2 O填充至終體積1L，并通過(guò)過(guò)濾器或高壓釜滅菌。將緩沖液儲(chǔ)存在4℃。如果您使用的是HEPES鈉鹽，請(qǐng)改用HEPES-Na方案。

注意事項(xiàng)：

HEPES可溶于水，價(jià)格便宜，并且通常具有生物惰性。但是，它確實(shí)參與了產(chǎn)生自由基的氧化還原反應(yīng)，并干擾了DNA和限制性內(nèi)切酶之間的反應(yīng)，但是由于空間位阻，其干擾程度小于Tris。同樣重要的是要注意，當(dāng)使用異質(zhì)連接蛋白通道時(shí)，不應(yīng)使用HEPES，因?yàn)樗鼤?huì)抑制其功能。如果要進(jìn)行毒性研究，請(qǐng)選擇HEPES鈉鹽而不是游離酸。

如何制作PIPES及使用注意事項(xiàng)

PIPES是哌嗪緩沖液家族的一員，與HEPES屬于同一家族。它是兩性離子Good's緩沖液，在6.1至7.5的pH范圍內(nèi)有效。由于pH范圍與HEPES略有不同，PIPES的濃度僅為HEPES濃度的一半。該緩沖劑不會(huì)與金屬絡(luò)合，因此可用于含金屬離子的溶液。它也可以用于色譜分析，電子顯微鏡固定植物細(xì)胞，以及代替草甘膦緩沖液。

PIPES的制備步驟：

要制備1升1M PIPES游離酸緩沖溶液，請(qǐng)將302.37g  PIPES游離酸添加到600 mL dH 2 O中。使用10N氫氧化鈉調(diào)節(jié)至所需的pH值。您可以在1M PIPES PDF協(xié)議中使用一個(gè)表。用dH 2 O填充至終體積1L，并使用過(guò)濾器或高壓滅菌器滅菌。儲(chǔ)存在4?C。如果您使用的是PIPES鈉鹽，請(qǐng)改用1M PIPES-Na PDF協(xié)議。

注意事項(xiàng)：

直到溶液的pH值升高到6.5以上時(shí)，PIPES的游離酸才容易溶解，但是PIPES的鈉鹽很容易溶解。如果使用的是游離酸形式的緩沖液，請(qǐng)使用氫氧化鈉將其轉(zhuǎn)化為鈉鹽，以提高在較低pH下的溶解度。像HEPES一樣，PIPES不適用于涉及氧化還原反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)，因?yàn)樗鼤?huì)導(dǎo)致自由基的形成。